腫瘤細(xì)胞的取材和培養(yǎng) 

(一)腫瘤細(xì)胞的取材方法:培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的材料一般來自患者，對實體瘤患者可取原發(fā)腫瘤組織或轉(zhuǎn)移灶，有胸、腹水患者可取胸水或腹水，白血病患者可取血液或骨髓液進(jìn)行培養(yǎng)。

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實體瘤取材方法:取術(shù)后或活檢標(biāo)本，要盡早浸入無血清培養(yǎng)液保鮮，盡快進(jìn)行培養(yǎng)。盡可能去除潰瘍及壞死組織，避免細(xì)菌、霉菌污染，對取自外露的腫瘤組織，應(yīng)在培養(yǎng)前在含二性霉素B 2μg/mL，青霉素200～1000u/mL，鏈霉素500μg/mL的培養(yǎng)液中浸泡10～20分鐘，再用洗液反復(fù)沖洗干凈后，再作培養(yǎng)。  

體腔液的取材方法:在無菌條件下采取體腔液(胸水或腹水)，不需加抗凝劑，可直接以1200r/min收集細(xì)胞，不要久置，也不要在冰中冷卻，而應(yīng)盡早接種。  

血液(骨髓)取材法:白血病患者可取血液或骨髓，主要以取外周血為研究對象，用肝素抗凝的注射器無菌抽取5～10mL外周血，置于試管中立刻分離培養(yǎng)。

腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)方法:腫瘤細(xì)胞對培養(yǎng)基要求不如正常細(xì)胞嚴(yán)格，一般常用RPM1640，DMEM、Mc-Coy-等培養(yǎng)基，血清濃度不高，10%即可，建議在原代培養(yǎng)時能加入生長因子或原患者血清(1%～2%)以利細(xì)胞生長，培養(yǎng)方法很多，主要有組織塊法、酶消化法、鉭網(wǎng)法、脫落細(xì)胞法等。

小鼠胚胎肝細(xì)胞，BNL CL.2細(xì)胞
小鼠肝癌細(xì)胞，H22細(xì)胞
小鼠腎集合管細(xì)胞（含 SV40病毒序列），M-1細(xì)胞
小鼠腎足細(xì)胞（含 tsSV40T序列），Mouse podocyte細(xì)胞
小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞，Y1細(xì)胞
小鼠前列腺癌細(xì)胞，RM-1細(xì)胞
小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞，DCS細(xì)胞
小鼠小腦組織細(xì)胞，C8-D1A細(xì)胞
小鼠垂體瘤細(xì)胞，GT1-1細(xì)胞
小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞，BV2細(xì)胞
小鼠腦瘤細(xì)胞，BC3H1細(xì)胞
小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞，Neuro-2a細(xì)胞
小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤瘤株，DCS細(xì)胞

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法如下：
組織塊培養(yǎng)法:將取得的瘤組織去除脂肪\結(jié)締組織及壞死部分，在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎組織，切成1~2mm3小塊，接種于事先涂有鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶（或皿）中，37℃ 5%或加蓋瓶塞在普通恒溫箱中培養(yǎng)。 

酶消化法:在上述的碎組織塊中加入0.25%胰蛋白酶或(2000u/ml膠原酶)在37℃水浴中消化30分鐘(或更長一些)，去除消化液，用洗液洗3次，培養(yǎng)液洗1次后，用*培養(yǎng)基懸浮，并用吸管吹打分散制成細(xì)胞懸液，計數(shù)。以5×108 ～10×108 /L細(xì)胞濃度，在含有10%小牛血清的RPMI1640(或Eagle MEM或DMEM)中37℃ 5% CO2下分瓶(或皿)培養(yǎng)。

小鼠肺成纖維細(xì)胞，WML2細(xì)胞
小鼠肺腺癌瘤株，LA795細(xì)胞
小鼠肺癌細(xì)胞，LLC細(xì)胞
小鼠肺成纖維細(xì)胞，MML細(xì)胞
小鼠肝癌細(xì)胞，Hepa 1-6細(xì)胞
小鼠胃癌細(xì)胞，MFC細(xì)胞
小鼠前胃癌細(xì)胞，MFC細(xì)胞
小鼠前胃癌細(xì)胞（綠色熒光蛋白標(biāo)記），MFC-GFP細(xì)胞
小鼠肝上皮細(xì)胞，BNL 1ME A.7R.1細(xì)胞
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞，CT26.WT細(xì)胞
小鼠正常肝細(xì)胞，NCTC 1469細(xì)胞

鉭網(wǎng)培養(yǎng)法:在一張面積約為1cm2 的鉭網(wǎng)上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊(1~2mm3 大小)，用鑷子輕壓，使其粘于網(wǎng)上，再把鉭網(wǎng)放入培養(yǎng)皿中，使網(wǎng)下的組織塊與皿壁緊緊接觸，于37℃ 5% CO2下培養(yǎng)，每隔2~3天換液一次，5天后可見有上皮細(xì)胞從網(wǎng)上移出，并能在相當(dāng)于腫瘤組織部位形成純凈的單層上皮細(xì)胞。  

脫落細(xì)胞法:將新鮮的腫瘤組織去除脂肪和結(jié)締組織，洗液洗2次后，用刀片將腫瘤組織切成細(xì)薄片，在切割的同時有許多上皮細(xì)胞脫落下來，脫落細(xì)胞經(jīng)洗滌后，加入*培養(yǎng)基，便可獲得較純的上層細(xì)胞，于培養(yǎng)瓶(或皿)中、37℃ 5% CO2下培養(yǎng)，每隔2～3天換液，7～10天上皮細(xì)胞逐漸長成單層。

在原代培養(yǎng)中，常在培養(yǎng)物中混有正常成纖維細(xì)胞，若把正常細(xì)胞誤認(rèn)為是癌細(xì)胞，就會使整個工作失去意義，若不及時去除這些成纖維細(xì)胞，由于它比腫瘤細(xì)胞生長快，zui終能抑制腫瘤細(xì)胞的生長。因此，盡早排除成纖維細(xì)胞，已成為腫瘤細(xì)胞長期培養(yǎng)建系的關(guān)鍵，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有許多因素能抑制成纖維細(xì)胞生長