醋酸菌菌種分離篩選方法:醋酸菌的細胞為橢圓至桿狀,單個成雙或成鏈,鞭毛周生或端生,運動或不運動,革蘭氏陰性菌,好氧菌,一般在乙醇或其他可氧化物的酵母煮液或酵母消化液培養基生長旺盛。
醋酸的鈉鹽和鈣鹽與三氯化鐵共熱,生成紅褐色沉淀,原液變成無色。可進行分離菌鑒別。
人胚腎細胞 293T細胞 二倍體細胞 2BS細胞,人乳腺癌細胞,A498細胞,L-02細胞,人肺癌細胞
培養基:
米曲汁乙醇碳酸鈣培養基:米曲汁(10-12BX)1000ml CaCO3 10-15g 95℅乙醇30-40ml(滅菌后加入) PH自然
葡萄糖碳酸鈣培養基:葡萄糖15g/L 酵母膏10g/L CaCO3 15g/L PH 6.8 乙醇30mL/L 酵母膏10g/L葡萄糖10g/L CaCO3 10-15g/L (常規篩選培養基) PH 6.8-7.0
注:常規培養基中的碳酸鈣易沉淀,平板不易觀察到透明圈,選擇米曲汁乙醇碳酸鈣培養基為好。
醋酸菌保存培養基:酵母膏15g/L葡萄糖10g/L CaCO3 15-20g/L 瓊脂15-20 g/L 3-4滴乙醇/試管。
液體種子和發酵培養基:乙醇30-35mL/L膏酵母10g/葡萄糖10g/L KH2PO40.5g/LMgSO40.5g/L
PH 6.5-6.8 2.菌種篩選:集菌:1-2g(5ml)樣品,在無菌下加入30-50ml/250ml米曲汁乙醇液體培養基(0.5ml 0.02℅結晶紫醋酸溶液/100ml培養液)中,
30-33℃震蕩培養24-48h,集菌液PH明顯下降,有醋味,鏡檢細胞革蘭氏染色陰性。形態與相符即可分離。
混菌法分離:(分離及初篩)適度稀釋10-5、10-6、10-7 取1.0ml菌液置于無菌平板或涂布中,每個梯度平行兩次,米曲汁乙醇碳酸鈣培養基倒平板,30℃24-48h,觀察有小菌落出現,菌落周圍形成透明圈,圈的大小因菌而異。
挑透明圈出現早且菌落豐厚,邊緣整齊,生長旺盛不同的菌落轉接于曲汁乙醇碳酸鈣斜面,30-33℃ 24-48h。根據菌落周圍溶解透明圈大小初步篩選出產酸高的菌種。
性能測定:(復篩)不同菌落接種于液體曲汁乙醇培養基(30-50ml/250ml)中,30℃震蕩培養24-48h。
鏡檢:染色鏡檢細胞整齊,橢圓或短桿狀,革蘭氏陰性菌。
性能測定: 醋酸定性分析:取發酵液(離心去菌體)5.0ml于潔凈試管中,用10℅氫氧化鈉中和PH至7.0,加入1℅三氯化鐵溶液2-3滴,搖勻,觀察溶液是否變黃褐色,加熱共沸,形成紅褐色沉淀,原液變無色者為產醋酸細菌。
生酸量測定:1.0ml發酵液于150ml三角瓶中,加中性蒸餾水10-20ml,酚酞指示劑2滴,用0.1mol/l氫氧化鈉滴定至微紅色。
醋酸量(g/100mL)= 氫氧化鈉摩爾濃度.Vx60.06x10-3 /樣品毫升數x100同時,進行單因素試驗,分別考察醋酸速度,耐高溫,耐酒精度,耐低酸度等主要生產性能,選擇優勢菌株。