細胞:C2C12細胞
中文名稱:小鼠成肌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂?。┤サ粢萠酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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分離:理想情況下,一種真正的干細胞系在體外處理前必須在體內環境下來鑒別出來。
但是,目前大多數分離干細胞的工作都是在體外模擬環境中進行的。體外分離技術是建立在對細胞表面標記物的識別基礎上。
已經用來純化干細胞的標記包括CD34、AC133、STRO-1、神經營養受體p7520等。分離方法包括熒光標記細胞分選、免疫磁分離和免疫吸附柱分離。
最近發現了一些新奇的細胞標記物陰性的干細胞,因此有些人對使用單一細胞標記物來分離干細胞提出了一些異議。
例如,細胞膜上的CD34表達并不總和干細胞的活動有關。在小鼠身上有大量靜止的干細胞系,它們缺乏CD34的表達,但是卻擁有完_全的再建能力。
一種類似的靜止CD34陰性的造血干細胞也在人體上被發現。因此,利用某些特定成熟細胞的表面標記物來去除成熟細胞而保留干細胞的方法將會在未來占據更大的優勢。