克服文庫構(gòu)建的缺陷
傳統(tǒng)的cdna文庫構(gòu)建途徑有許多與生俱來的缺陷：1)cDNA合成不佳，2)連接效率低，3)
在限制性酶切過程中造成克隆缺口或者斷裂。任何一種缺陷都有可能造成目的克隆的丟失，尤其對于低豐度的基因。如果你確實得到克隆，仍有可能被限制性內(nèi)切酶消化或者在接下來的亞克隆步驟中丟失，這是由于連接反應(yīng)的無效造成的。CloneMiner™ cDNA 文庫構(gòu)建試劑盒提供了一種全新的更加有效的構(gòu)建文庫的途徑，而沒有限制性內(nèi)切酶克隆法的局限。

高質(zhì)量cDNA文庫的構(gòu)建
新的CloneMiner™ 試劑盒利用兩種*的技術(shù)使你能夠獲得全長基因百分比高并且能夠消除文庫構(gòu)建中限制性酶切引起的偏差· SuperScript™ II逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)從初始的mRNA材料中得到全長cDNA的百分比很高。SuperScript™ II逆轉(zhuǎn)錄酶（RT）的Rnase H活性低，能極大減少*鏈合成時RNA的降解。
· GateWay®技術(shù)，一種已經(jīng)深入了解的位點特異性重組系統(tǒng)，介導(dǎo)了文庫的構(gòu)建過程。這使得您的cdna片段轉(zhuǎn)入到GateWay®供載體以構(gòu)建整個文庫。然后就可以通過GateWay®技術(shù)將DNA重組到各種各樣的表達(dá)載體上。反應(yīng)保持了原有的方向和開放閱讀框，所以不需要多余的重復(fù)驗證。有效地避免了限制酶和連接酶的使用。您可以構(gòu)建高質(zhì)量的文庫用于深入的分析。 

圖1 CloneMiner™ cDNA文庫構(gòu)建方法 
1. 起始mRNA
2. 退火的寡聚dT－attB2－Biotin 引物
3. 用SuperScript™ II逆轉(zhuǎn)錄酶合成*鏈和第二鏈cDNA
4. 連接attB1接頭
5. 加上接頭的cDNA和pDONR™222載體混合在BP Clonase™酶存在時構(gòu)建入門文庫
6. 得到的入門克隆有attL位點；產(chǎn)生的副產(chǎn)物是自由的ccdB基因
7. 轉(zhuǎn)化E.coli并選擇抗卡那霉素的克隆






獲得全長的完整的克隆 
傳統(tǒng)的克隆方法需要使用限制酶來改變您的cDNA末端，以適合克隆載體，這存在一種風(fēng)險，即您的基因可能被同樣的酶切成幾段。通過使用GateWay®技術(shù)來替代限制酶，CloneMiner™試劑盒避免了這種風(fēng)險。沒有任何克隆暴露在限制酶中，所以提供了的克隆代表性和100％的全長的完成cDNA（圖2）