按現代的觀念，凡是混入培養環境中對細胞生存產生有害的成分和造成細胞不純的異物都應該視為污染。根據這一概念，組織培養污染物應包括生物（真菌、細菌、病毒和支原體）、化學物質（影響細胞生存、非細胞所需的化學成分）、細胞（非同種的其他細胞）。其中一微生物zui為多見。另外，隨著使用細胞種類增多，不同細胞交叉污染，尤其是Hela細胞的污染也時有發生，從而造成細胞不純。

一、污染途徑 污染物，特別是微生物常通過下列途徑進入培養體系，造成污染

1 空氣：空氣是微生物及塵埃顆粒傳播的主要途徑。空氣流動性大，如果培養操作場地于外界隔離不嚴格或消毒不充分，外界不潔空氣很容易進入造成污染。因此，培養設施不能設在通風場所。無菌操作應在凈化臺內進行，工作時要帶口罩，以免因講話、咳嗽等使外界污染進入操作面，造成污染。

2 器材：各種培養器皿、器械消毒不*和洗刷不干凈導致污染，另外需要對培養箱進行定期消毒，防止形成污染

3 操作：實驗操作無菌觀念不強，技術不熟練，使用污染的器皿或封瓶不嚴等，都可以造成污染。培養兩種細胞以上時，操作不規范，交叉使用吸管或培養液、瓶等有可能導致細胞交叉污染。

4 血清：有些血清在生產時就已經被支原體或病毒等污染，變成了污染。

5 組織樣本：原代培養的污染多數來源于組織樣本；取材時碘酒消毒后脫碘不*，可造成碘混入組織，細胞或培養液中，影響細胞細胞生長。

二、污染對培養細胞的影響及污染的檢測

由于體外培養細胞自身沒有抵抗污染的能力，而且培養基中的抗生素抗污染能力有限，因而培養細胞一旦發生污染多數將無法挽回。細胞污染早期或污染程度較輕時，如果能及時去除污染物，部分細胞有可能恢復、但是當污染物持續存在培養環境中，輕者細胞生長緩慢，分類象減少，細胞變得粗糙，輪廓增強細胞漿出現顆粒、污染較嚴重，細胞增值停止，分裂象消失，細胞質中出現大量堆積物，細胞變圓、脫壁。

（一）細菌污染對培養細胞的影響及污染物的檢測

常見的污染細菌有大腸桿菌、假單孢菌、葡萄球菌等。細菌污染初期由于培養體系的抗生素作用，其繁殖處于抑制狀態，細胞生長不受明顯影響，污染情況用倒置顯微鏡觀察不易判斷。懷疑培養細胞有細菌污染時，取10ml細胞懸液離心1000轉5分鐘，沉淀中加入無抗生素培養液2ml,將細胞放培養箱培養。