一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />初步了解什么是染色體帶型，掌握染色體G顯帶方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
染色體的分帶是70 年代發(fā)展起來的技術(shù)，其中使用zui廣泛的是G帶。顯示G 帶的方法很多，zui常用的是將已制成染色體標(biāo)本的玻片進(jìn)行預(yù)處理，然后進(jìn)行Giemsa染色。預(yù)處理的方法很多，如用熱堿、各種蛋白酶、尿素、去垢劑或其它溶液等，其中zui常用的是用胰蛋白酶進(jìn)行預(yù)處理，方法簡(jiǎn)便，周期短。
G帶區(qū)在DNA較豐富的A-T 對(duì)，在間期核呈固縮狀態(tài)，而且是DNA晚復(fù)制區(qū)之一。有相當(dāng)一部分中度重復(fù)序列DNA可能在G帶區(qū)，Giemsa染料在G帶區(qū)是與DNA結(jié)合，而且與結(jié)合DNA的染色質(zhì)非組蛋白有關(guān)。G帶區(qū)位于染色體的兩臂上，和Q帶區(qū)相對(duì)應(yīng)，而與Ｒ?guī)^(qū)相反。
獲得優(yōu)良的G帶需要反復(fù)的實(shí)踐，干凈的制片，豐富而又清楚的分裂相，固定的實(shí)驗(yàn)條件和足夠的經(jīng)驗(yàn)是十分重要的。
三、實(shí)驗(yàn)材料
小白鼠骨髓細(xì)胞染色體制片不經(jīng)染色留下的標(biāo)本片。
四、實(shí)驗(yàn)器具和藥品試劑
顯微鏡、冰箱、恒溫箱、水浴鍋、立式染缸、鑷子、切片架、切片盒、燒杯、量筒、吸管。
胰蛋白酶(Diffco,1:250)、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、氯化鈉、PH6.8磷酸緩沖液 、Giemsa 原液、2×SSC溶液。
五、 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
G帶的方法很多，現(xiàn)介紹3種方法，但無論那種方法，片齡以不超過5天為宜。
(一)胰蛋白酶－EDTA法
1．0.1％胰蛋白酶和0.02％EDTA按1：1混合于立式染缸中，并調(diào)至PH6.8，暫置冰箱中備用。
2． 將在37℃溫箱中預(yù)處理3個(gè)小時(shí)的標(biāo)本片分別浸入胰蛋白酶和EDTA混合液中，輕輕搖動(dòng)30～75秒鐘。
3． 將處理過的標(biāo)本在磷酸緩沖液中漂洗數(shù)秒。
4． 立即用1:10 Giemsa染液染色20～40 分鐘。
5． 流水沖洗，空氣干燥后鏡檢。
(二)胰蛋白酶消化法
1．37℃烤片2～3小時(shí)。
2．將制片放入37℃預(yù)熱或15℃預(yù)冷的0.25％的胰蛋白酶溶液中5～30秒。
3．0.85％NaCl溶液沖洗兩次，涼干后染色。
(三)ＡＳＧ(Acetic-saline-Giemsa)法
1．用甲醇、冰醋酸固定液固定，空氣干燥法制片的標(biāo)本。
2．浸入2×SSC溶液中，60℃溫育1小時(shí)。
3．蒸餾水沖洗。
4．1/20 Giemsa 染液染色1 小時(shí)。
5．水洗后涼干鏡檢。